4-Nitrofenylfosfatase är ett enzym som katalyserar hydrolysreaktionen av 4-nitrofenylfosfat till fosfat och 4-nitrophenol, vilket är en gulaktig förening och kan ses med blotta ögat. Denna reaktion används ofta i biokemiska laboratorier för att undervisa i enzymkinetik på grund av den lätta detektionen av produkten.
4-Nitrofenylfosfat (4-NPP) är ett kemiskt ämne som används som en substrat i enzymsassayer för att mäta aktiviteten hos fosfohydrolaser, en grupp enzym som bryter ned fosfatestrar. När 4-NPP utsätts för en fosfohydrolas reagerar det och bildar 4-nitrofenol och fosfat. Denna reaktion orsakar en färgförändring från färglöst till gult, vilket kan mätas kvantitativt med hjälp av ett spektrofotometer. På så sätt kan forskare använda 4-NPP för att snabbt och enkelt testa hur aktivt ett visst fosfohydrolas-enzym är under olika experimentella förhållanden.